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百裡香酚對沙門氏菌Ⅲ型分泌系統的抑制作用及醫學機制

發布時間:2019-01-26 20:13 論文編輯:lgg 價格: 所屬欄目:醫學論文 關鍵詞: 百裡香酚沙門氏菌分泌系統

本文是一篇醫學論文,中、西醫學在張仲景和蓋倫完全相悖的醫學範式引導下,開始步入了分道揚镳的曆史進程。在中華文化強調“中和”的大背景下,學術界便有了“海納百川”的寬松氣氛。

本文是一篇醫學論文,中、西醫學在張仲景和蓋倫完全相悖的醫學範式引導下,開始步入了分道揚镳的曆史進程。在中華文化強調“中和”的大背景下,學術界便有了“海納百川”的寬松氣氛。(以上内容來自百度百科)今天為大家推薦一篇醫學論文,供大家參考。
 
前 言
 
沙門氏菌是引發人類和動物食物中毒的首要食源性病原菌之一,也是在全球公共衛生學上有重要意義的人獸共患病原菌,該病原菌在自然界有廣泛的宿主譜,主要寄居在哺乳類、爬行類、鳥類及昆蟲的胃腸道中,絕大多數對人和動物均适應。沙門氏菌感染動物後常導緻嚴重的疾病,主要侵害低齡動物,導緻傷寒、敗血症、胃腸炎及其他組織局部炎症,并可引起懷孕母畜流産和死胎等緻死性感染,給畜禽養殖業帶來嚴重的經濟損失。其中雞白痢是沙門氏菌引起的以排白色糞便為特征的急性敗血性傳染病[1], 雞白痢沙門氏菌不但會通過飲水、空氣及飼料等進行群間水平傳播,還能通過攜帶病菌的種雞垂直傳播給下一代,是危害養雞業發展的重要傳染病之一。豬霍亂沙門氏菌及豬傷寒沙門氏菌是豬敗血症、腸炎及副傷寒的主要病原菌,該病常在密集型飼養的斷奶仔豬中暴發,導緻仔豬厭食、下痢、呼吸困難并最終引起仔豬死亡,有時甚至與其他病毒,如豬瘟病毒和藍耳病毒等混合感染,發病率和死亡率更高[2,3]。目前臨床上沙門氏菌感染較難控制,治療效果往往不理想,給畜禽養殖業造成了巨大的經濟損失,并嚴重威脅公共健康和食品安全。沙門氏菌引起的食源性疾病在我國居細菌性食源性疾病的首位[4]。2006-2010年間我國報告病因明确的細菌性食源性疾病暴發事件中,70%-80%是由沙門氏菌所緻。美國平均每年有多達 120 萬沙門氏菌的感染者, 其中超過 23000 人需要住院治療, 450 人因感染沙門氏菌而死亡[5]。歐洲食品安全局( EFSA) 2007 年 4月 3 日發布的沙門氏菌調查情況表明, 沙門氏菌在歐洲是引起人類食源疾病的第二大原因,2005 年共有 176395 人受沙門氏菌感染。根據 EFSA 的調查, 大約四分之一( 23.7%) 的肉雞場存在沙門氏菌,三分之一種豬場發現沙門氏菌。目前針對沙門氏菌感染,普遍采用抗生素進行治療,但由于抗生素的長期使用和濫用及其不可避免的易誘導耐藥性等因素導緻了沙門氏菌耐藥性日益嚴重,耐藥譜逐漸加寬[6]。這一現象對于臨床上沙門氏菌感染的治療更是雪上加霜。因此臨床上迫切需要尋求新的抗感染策略及藥物來預防和治療沙門氏菌感染。
近年來研究發現病原菌的緻病力與其分泌的各種毒力蛋白或效應蛋白密切相關,但上述蛋白分子不是細菌生命所必需成分。因此,以細菌特異性用于感染宿主細胞的蛋白或者蛋白複合物為靶标的藥物,不僅可發揮抗感染作用,且其對細菌産生的選擇壓力小,不易誘導耐藥性。Ⅲ型分泌系統(T3SS)廣泛的分布于革蘭氏陰性細菌中,其主要功能是分泌和轉運病原菌毒力因子。對于沙門氏菌,其緻病力便是通過兩套 T3SS 系統分泌效應蛋白,分别介導細菌侵入和在胞内的增殖,在其緻病過程中起着決定性作用[7]。此外,這些效應蛋白在細菌逃避免疫系統攻擊過程中也有不可或缺的作用[6]。研究表明,敲除沙門氏菌毒力島或編碼效應蛋白的基因顯著降低沙門氏菌侵襲宿主細胞的能力。中藥自應用至今已有數千年的曆史,其中的有效化學成分在抗細菌感染方面的作用已确證。這些天然化合物具備分布廣泛, 結構多樣, 生物學活性豐富等多方面的優勢,是新藥開發和先導化合物發現的寶貴資源。而且由于這些有效化合物往往不具有傳統的殺菌活性,其誘導耐抗藥性的可能性也很低。本項目以沙門氏菌Ⅲ型分泌系統為藥物靶标,從抗毒力角度出發篩選及研究天然化合物在抗沙門氏菌細菌感染過程中的作用及其機制,為畜禽養殖降低或替代抗生素的應用和臨床上有效防治沙門氏菌及其它革蘭氏陰性菌感染提供新的研發策略和先導化合物。另外,這些化合物也可做為分子探針,用于探讨Ⅲ型分泌系統工作機制,為進一步開發精确高效抑制其功能的化合物提供理論基礎,因此具有重要的科學及實踐意義。
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第一篇 文獻綜述
 
第 1 章 沙門氏菌研究進展
沙門氏菌是引起人類及動物食物中毒的首要食源性病原菌,也是全球公共衛生學上有重要意義的人獸共患病原菌,該病原菌在自然界有廣泛的宿主譜,主要寄居于胃腸道,引起胃腸道感染。同時沙門氏菌也是導緻畜禽養殖業遭受經濟損失的重要病原菌,嚴重威脅着人類公共健康和食品安全,因在人類及動物中高的發病率,引發世界各國對抗沙門氏菌感染的研究高度重視。
 
1.1 微生物學特性
沙門氏菌屬是在 1885 年被美國病理學家沙門所發現。發現至今的 130 年時間裡,超過 2500 種血清型被描述為沙門氏菌[8]; 但是,因為它們很罕見,科學家對它們知之甚少。在大多數人類感染中,少于 100 種血清型。沙門氏菌屬,為革蘭氏陰性細菌,無芽孢的棒狀杆菌。菌體直徑大小為 0.6-0.9μm,菌體長度為1-3μm,菌體兩端鈍圓,無莢膜,除雞白痢沙門氏菌和雞傷寒沙門氏菌外其他類别沙門氏菌均周身有鞭毛,屬兼性厭氧型細菌。沙門氏菌在 10℃-42℃均能夠生長,35℃-37℃為其最适生長溫度,最适 pH值為 7.0±0.8。對周圍環境的營養要求不高,普通培養基便可以生長旺盛,高鹽環境利于其生長。沙門氏菌在普通瓊脂培養基、麥康凱培養基和伊紅美蘭培養基上,呈現出光滑、圓形、無色半透明 S 型菌落,R 型菌落邊緣不整齊表面幹燥。生化反應特性:不發酵乳糖和蔗糖,不産生吲哚,不分解尿素,對苯丙氨酸不脫氨,VP 實驗陰性,大多産生硫化氫。發酵甘露醇、山梨醇、葡萄糖和麥芽糖,除傷寒杆菌産酸不産氣外,其他沙門氏菌均産酸産氣。
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1.2 流行病特征
沙門氏菌為一種重要的人獸共患病原菌,該病原菌在自然界有廣泛的宿主譜,存在于土壤、糞便、和被污染的水及食品中。人飲用被污染的水和誤食被污染的食物是引起沙門氏菌感染的主要途徑。畜禽養殖者,直接接觸沙門氏菌感染的動物及被污染的肉類或者飼料,同樣會引起沙門氏菌感染。人類感染沙門氏菌後的 72h 内,主要表現為腹瀉、高燒、腹部疼痛。患者患病時間通常為 4 到 7 天,大部分個體在治療後得以恢複[9]。部分個體會從腹瀉開始發展更為嚴重從而需要住院治療。在這部分患者中,沙門氏菌的感染可能會從普通的腸道感染通過血液傳播逐漸發展成為系統性感染。如果不能夠及時給予抗生素進行治療,可能會導緻人的死亡。大于 65 歲的老人、小于 5 歲的嬰幼兒等免疫力低下的人群或者糖尿病、癌症及艾滋病等免疫缺陷的患者更容易引起嚴重的疾病。某些血清型的沙門氏菌由于已經形成了耐藥性,感染後便增加了住院治療的風險,更容易引起機體的系統性感染,甚至可能會因為多重耐藥而導緻治療失敗。調查顯示,從個體感染沙門氏菌後,到區域性的沙門氏菌疾病爆發流行大約需要兩周到四周的時間(圖 1)。
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第 2 章 百裡香酚體内外藥物活性評價.............47
2.1 材料與方法 .........47
2.2 實驗結果 .............53
2.3 讨論............57
2.4 小結............58
第 3 章 百裡香酚抗沙門氏菌Ⅲ型分泌系統的作用機制.....59
3.1 材料和方法 .........61
3.2 結果............70
3.3 讨論............83
3.4 小結............83
 
第 3 章 百裡香酚抗沙門氏菌Ⅲ型分泌系統的作用機制
 
自上個世紀 90 年代以來,科學技術的不斷推進以及生物科學領域檢測手段的不斷發展,為我們發現藥物作用靶點,化合物的作用機制分析提供了硬件條件。質譜技術的發展為我們能夠快速準備的發現藥物作用靶點提供了技術支撐。随着對分子生物學和生物化學深入研究,點擊化學技術和圓二色譜技術的發展,更為我們研究化合物與靶蛋白相互作用提供了理論依據。前面三章研究提示百裡香酚能夠抑制沙門氏菌Ⅲ型分泌系統的功能。為了能夠闡明百裡香酚抑制Ⅲ型分泌系統的作用機制,本研究應用生物化學、分子生物學、質譜技術、點擊化學及圓二色譜技術手段,研究百裡香酚的作用機制及作用靶點。
 
3.1 材料和方法
3.1.1 材料
3.1.1.1 菌株和質粒
鼠傷寒沙門氏菌野生株 SL1344 由美國普渡大學羅招慶教授惠贈, JS749att::pDX1::hilA-lacZ、JS751 att::pDX1::sopB-lacZ、JS752 att::pDX1::sicA-lacZ 和JS753 att::pDX1::hilA-lacZ 菌株由美國伊利諾伊大學 James M.Slauch 教授惠贈。Δlon 及 ΔinvA 缺失菌株由美國普渡大學周道國教授惠贈。pGEX-6P-1、pKS、pRK600、pZLQ、pKD3、pKD46 和 pET32a 空質粒均購自 Invitrogen 公司。
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