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水泡性口炎病毒M蛋白抑制宿主抗病毒醫學反應機制的研究

發布時間:2019-01-30 20:24 論文編輯:lgg 價格: 所屬欄目:醫學論文 關鍵詞: 口炎病毒蛋白抑制反應機制

本文是一篇醫學論文,盡管中、西醫學還不可能融合成為一種統一的醫學模式,但可以獨立發展,并存共榮,整合互補。緣于現代信息論、系統論和控制論的影響,西醫學的發展趨勢若僅僅是單

本文是一篇醫學論文,盡管中、西醫學還不可能融合成為一種統一的醫學模式,但可以獨立發展,并存共榮,整合互補。緣于現代信息論、系統論和控制論的影響,西醫學的發展趨勢若僅僅是單純地重視分析而忽略了整體結構和整體功能,無疑将漸行漸窄。(以上内容來自百度百科)今天為大家推薦一篇醫學論文,供大家參考。
 
前 言
 
VSV(Vesicular stomatitis virus)是彈狀病毒科(Rhabdoviridae)水泡病毒屬(Vesiculovirus)的成員,應用中和試驗和補體結合試驗,可将其分為兩個血清型:新澤西型(NJ)和印第安型(IND)。該病毒為不分節段的負鍊 RNA 病毒,不僅具有典型的嗜上皮性,而且通過體外培養顯示,其對不同種類細胞具有廣泛的嗜性。VSV 的基因組從 3′端→5′端依次排列着 N、NS、M、G、L 5 個不重疊的基因,分别編碼核病毒蛋白(N)、磷蛋白(P)、基質蛋白(M)、糖蛋白(G)以及 RNA 依賴的 RNA 聚合酶(L)。由于 VSV 與肆虐西非的埃博拉病毒同屬于單股負鍊病毒目(該病毒目還包括狂犬病毒、Nipah 病毒、Hendra 病毒等多種高緻病性病毒),但 VSV 對人的緻病性相對較弱,所以其被一些科學家認為是研究單股負鍊病毒目病毒的理想模型。
RNA 病毒由于其有限的編碼能力,必須利用宿主蛋白和細胞膜進行高效複制。它們可以利用細胞中某些蛋白的經典功能、修飾宿主蛋白或蛋白複合體的功能、亦或招募宿主蛋白發揮新功能等方式完成複制增殖。這些都是通過病毒蛋白和宿主蛋白之間的相互作用來完成的。因此,從病毒與宿主相互作用的角度入手,篩選在病毒複制過程中起關鍵作用的宿主蛋白,不僅為解析病毒緻病機制提供新的探索方向,而且為抗病毒藥物靶點的篩選提供性的理論依據。由于 VSV-M 蛋白在病毒組裝與出芽、誘導細胞凋亡、抑制宿主細胞抗病毒反應等病毒重要的生命周期中發揮主要作用。因此,本研究利用酵母雙雜交技術篩選與 M 蛋白相互作用的宿主蛋白,并通過酵母回轉、GST-pull down、激光共聚焦等實驗加以驗證。利用 PCR 定點突變技術、酵母回轉和 β-半乳糖苷酶活性實驗篩選 M 蛋白與宿主相互作用的關鍵氨基酸位點。利用 RNA 幹擾或過表達技術進一步驗證這些蛋白在病毒複制過程中所發揮的作用,并分析其影響病毒複制的機制。該研究結果不僅有助于闡明 VSV 的緻病分子機制,而且将為抗病毒藥物靶點的篩選提供重要的理論依據。
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第一篇 文獻綜述
 
第一章 水泡性口炎病毒的研究現狀
水泡性口炎(Vesicular stomatitis)是一種由水泡性口炎病毒(vesicularstomatitis virus,VSV)感染引起的牛、馬、豬等多種動物和人以口炎為主要特征的人獸共患性傳染病。臨床特征表現為嘴唇、舌頭、牙龈、乳頭、蹄匣等部位出現水泡或潰瘍,在獸醫臨床上極易誤診。人感染VSV後呈現類似感冒症狀(如發熱、肌肉疼痛、頭疼等)甚至發生腦炎,具有重要的公共衛生學意義。VSV 屬于彈狀病毒科(Rhabdoviridae)水泡病毒屬(Vesiculovirus)的成員,應用中和試驗和補體結合試驗,可将其分為兩個血清型:新澤西型(NJ)和印第安型(IND)。迄今已發現VSV有14個病毒型,在抗原性方面有不同程度的差異,但在毒粒結構、基因組成、轉錄調控和病毒蛋白等方面均類似[1]。該病自1821年在美國暴發以來,許多國家陸續有該病的報道,其發病很可能呈世界性分布[2]。由于其在許多國家的流行蔓延造成世界肉類市場的混亂,同時使感染動物(如豬和牛)的生産能力下降而造成嚴重的經濟損失,因此,該病對養殖業的潛在危害不容忽視[3]。鑒于該病對國際貿易産生的嚴重影響,被世界動物衛生組織(OIE)列為必須通報的動物疫病,我國也将其列為《國家中長期動物疫病防治規劃(2012-2020年)》中重點防範的13種外來動物疫病之一。近年來,國内學者對雲南省蝙蝠攜帶病毒的病原生态學研究發現,VSV是蝙蝠攜帶的病毒之一[4]。這一結果不僅增加了我們對這種重點外來動物病原的防範意識,而且也增強了對該病毒相關研究的必要性和緊迫性。
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1.1 水泡性口炎病毒的結構
VSV是典型的、不分階段的單股負鍊RNA病毒。病毒粒子呈彈狀病毒科特征性的子彈形狀。根據其結構和功能可将該病毒分為内部的核糖核蛋白複合體(ribo-nucleoprotein complex,RNP)和包裹在RNP上的外膜結構[5]。核糖核蛋白複合體由磷蛋白(P)、核蛋白(N)、RNA依賴的RNA聚合酶L和病毒基因組組成,在病毒轉錄複制過程中發揮主要作用。外膜結構由基質蛋白(M)和糖蛋白(G)組成,主要介導病毒感染、入侵細胞以及病毒粒子組裝等[6]。
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1.1.1 水泡性口炎病毒基因組結構
水泡性口炎病毒基因組全長11,161 nt, 其中包括編碼病毒5個蛋白的基因和調節序列,從左到右順序依次為3′-(leader)、N、 P、 M、 G、L、 (trailer)-5′。3′leader是病毒蛋白mRNA和全長正義反基因組RNA合成過程中RNP特異性識别的啟動子序列。除此之外3′leader序列在病毒複制過程中還可以被轉錄出47 nt的未知功能的短序列。5′trailer在病毒反基因組中的互補序列是和合成全長病毒基因組的啟動子,該序列也可以被轉錄出45 nt的未知功能的短序列[7]。每個基因在起始或終止位置都存在保守的3′-UUGUCnnUAG-5′或3′-AUACUUUUUUU-5′序列,這兩段序列是病毒mRNA合成過程中轉錄起始或終止的信号[8]。
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第三章 M 蛋白與 p8 及eIF3i 相互作用的驗證及互作位點的篩選...49
3.1 材料試劑 .............49
3.2 方法............51
3.3 結果............55
3.4 讨論............62
3.5 小結............64
第四章 p8 介導 M 蛋白對宿主細胞轉錄抑制作用.....65
4.1 材料試劑 .............65
4.2 方法............66
4.3 結果............68
4.4 讨論............72
4.5 小結............73
第五章 eIF3i 影響 VSV 複制增殖機制的研究............75
5.1 材料試劑 .............75
5.2 方法............76
5.3 結果............79
5.4 讨論............85
5.5 小結............88
 
第五章 eIF3i 影響 VSV 複制增殖機制的研究
 
VSV-M 蛋白不僅能夠抑制宿主細胞轉錄,還可以抑制宿主細胞蛋白的翻譯。在前期研究中,通過酵母雙雜交實驗篩選到了與 M 蛋白相互作用的宿主翻譯起始因子亞單位 eIF3i。VSV-M 蛋白是否通過與 eIF3i 相互作用,來抑制宿主蛋白合成,尚有待于進一步研究。eIF3i 又稱 TRIP-1,是 eIF3 複合體的一個亞基,最早由 Chen 于 1995 年發現該蛋白為可以與 II 型 TGF-β 受體相互作用而被命名為 TRIP1[130]。eIF3 是分子量最大和最複雜的起始因子,它在翻譯起始進程中扮演着非常重要的角色[100]。eIF3 可以與遊離的 40s 核糖體亞基結合,阻止 40s 亞基與 60s 亞基的直接結合,從而防止形成無翻譯活性的 80s 複合物。除了在翻譯起始過程中發揮核心作用,eIF3 還可以通過調節不同類型的 mRNA 的翻譯起始,選擇性地調控蛋白的合成,從而對細胞的生長進行調控[170]。大量的證據顯示,eIF3 在許多病毒複制過程中發揮着重要作用。但 eIF3 是否參與 VSV 複制,尚無相關的研究。通過酵母雙雜交實驗發現 eIF3i 與 VSV-M 蛋白存在相互作用,但其在 VSV 複制過程中的作用尚不清楚。因此,本章針對以上内容展開研究。
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結 論
 
1.發現并證實水泡性口炎病毒基質(M)蛋白通過與真核細胞通用轉錄因子TFIIH 亞單位 p8 相互作用來抑制宿主細胞轉錄。進一步完善了水泡性口炎病毒基質(M)蛋白抑制宿主抗病毒蛋白表達,逃逸宿主抗病毒反應的分子機制。
2.發現并證實水泡性口炎病毒基質(M)蛋白通過與真核細胞翻譯起始因子亞單位 eIF3i 相互作用後,抑制 Akt1 的磷酸化,從而阻斷 I 型幹擾素下遊信号通路的傳導,以利于自身複制。發現了水泡性口炎病毒利用一種新的機制阻斷宿主抗病毒反應。
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參考文獻(略)
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